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高效液相色譜柱的柱長及內(nèi)徑要怎么選擇?

更新時間:2021-10-12      點擊次數(shù):2419
  高效液相色譜柱是由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管的材質(zhì)有很多,比如聚合物、玻璃、不銹鋼等。但是建議柱管用不銹鋼材質(zhì),因為不銹鋼這種金屬耐高壓、耐腐蝕且硬度高,相比于玻璃等材質(zhì)不易摔壞。不過當壓力不高于70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管。對于色譜柱柱管內(nèi)壁要求有很高的光潔度,不銹鋼柱內(nèi)壁會經(jīng)過多次拋光,這是為提高柱效,減小管壁效應。0.1μm高光潔度色譜柱柱管能夠快速分析的同時保持超高的柱效;使用壽命長,不僅能夠減少頻繁更換色譜柱帶來的重新進行方法驗證、條件摸索等工作,還大大的降低了使用成本;具備優(yōu)良的選擇性和分離能力。
 
  除了拋光,也有在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料來提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光是相同的。色譜柱兩端的柱頭內(nèi)裝有篩板,通常是不銹鋼和peek材質(zhì)制作的,根據(jù)需求選擇與色譜柱匹配的柱篩板,孔徑取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
 
  柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應。
 
  高效液相色譜柱的柱長及內(nèi)徑的選擇原則是什么?長度的選擇:柱越長,總柱效越高(n值越大),柱越長,分析時間也越長。250—300mm是普遍的柱長,實驗室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物;500—600mm,要求較高分辨率的應用,—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質(zhì)的復雜樣品程序升溫分析。
 
  內(nèi)徑:柱效率與柱半徑平方成反比,內(nèi)徑越小柱效越高,但內(nèi)徑越大,柱容量也增加,允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時,則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡,將會導致色譜峰畸變,柱分辨率降低,重現(xiàn)性不好。因此對于復雜樣品需要準確分離,必須使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物,為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子,目前實驗室使用常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
 
  分析大分子量化合物選擇大孔徑高效液相色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長色譜柱使用壽命等。色譜柱內(nèi)徑有2.1、3.0、4.6、10mm可供選擇,不銹鋼材質(zhì)不易因為磕碰損壞柱管。

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